DZNep Does Not Influence Autophagy Gene Expression in the Colon Cancer Cell Line HT-29

Authors : Timur Koca, Ersin Akinci, Betül Ünal, Cumhur Ibrahim Başsorgun, Gülsüm Özlem Elpek

Pages : 521-525

View : 28 | Download : 10

Publication Date : 2019-01-01

Article Type : Research

Abstract :Amaç: Otofaji AP , fonksiyonel olmayan organelleri ve hatalı katlanmış proteinleri degrade ederek, hücrenin hayatta kalmasını sağlayan iyi korunmuş bir mekanizmadır. 3-Deazaneplanocin A hydrochloride DZNep ve otofaji arasındaki ilişkiyi inceleyen az sayıda çalışma bulunmaktadır. Bu öncül çalışmanın amacı, DZNep'in kolon kanseri hücre hattı HT-29'da otofaji ile ilişkili genler olan, Beclin-1, Ulk1, Ulk2 ve Uvrag'a olan etkilerini araştırmaktır.Gereç ve Yöntemler: HT-29 insan kolorektal adenokarsinom hücreleri kültür ortamına ekildi. Ertesi gün, S-Adenosylmethionine bağımlı metiltransferaz inhibitörü olan 25 µmol DZNep, hücre kültürüne ilave edildi. DZNep, dört gün sonra kültür ortamı değiştirilerek hücrelerden uzaklaştırıldı. Hücreler deney süresince doku kültürü inkübatöründe tutuldu. DZNep uygulamasının 4. gününde, DZNep uygulanmış ve uygulanmamış hücrelerden total RNA izolasyonu yapıldı. cDNA’lar, DNaz uygulanmış 2 µg RNA’dan ters transkriptaz ile sentezlendi. cDNA’lar daha sonra kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu ile analiz edildi. Sonuçlar, HT-29 hücrelerinde relatif ekspresyon düzeyleri şeklinde sunuldu.Bulgular: DZNep, HT-29 kolorektal kanser hücrelerinin %50’sinden fazlasını öldürerek ekstrem hücre ölümünü indükledi. Otofaji genlerinin ifadeleri şu şekildeydi; Beclin-1 için hafif, Ulk1 ve Uvrag için orta ve Ulk2 için yüksek.Sonuç: Burada çalışılan bazı otofaji genleri; Beclin-1, Ulk1, Ulk2, Uvrag, DZNep uygulamasından etkilenmemiştir. DZNep uygulaması sonucunda, HT-29 hücrelerinde meydana gelen hücre ölümü otofaji aracılı değildir
Keywords : 3-Deazaneplanocin A, Otofaji, HT-29, Kolon karsinomu, Gen ifadesi