SIĞIRLARDA OVUM PİCK-UP (OPU) TEKNİĞİ KULLANILARAK İN VİTRO EMBRİYO ÜRETİMİ

Authors : Numan Akyol, Sedat Hamdi Kizil, Tahir Karaşahin, Muharrem Satilmiş, Yutaka Hashiyada

Pages : 0-9

View : 15 | Download : 7

Publication Date : 2008-06-01

Article Type : Research

Abstract :Bu çalışmanın amacı, sığırlarda birim zamanda elde edilen embriyo sayısını artırmak için ultrason rehberliğinde oosit toplanması (Ovum pick-up, OPU) yönteminin kullanım imkanlarının araştırılmasıdır. Çalışmada, Lalahan Hayvancılık Merkez Araştırma Enstitüsünde barındırılan 3-7 yaş arasında bulunan sekiz baş Siyah Alaca inek oosit vericisi olarak kullanılmıştır. Ultrason rehberliğinde oosit toplamak amacıyla 7.5MHz’lik konveks prob ve aspirasyon iğnesinin birlikte yerleştirilmiş ve sığırlardaki transvaginal çalışmalar için geliştirilmiş olan özel ekipman kullanılmıştır. OPU uygulamaları, her hayvanda iki eşit periyot halinde ve periyotlar arasında fizyolojik dinlenme süreci bırakılmak kaydıyla düzenli olarak her hafta ve toplam 16 kez gerçekleştirilmiştir. Elde edilen oositlerin in vitro maturasyonları için TCM-199 (Tissue Culture Medyum) medyumu, fertilizasyonları için Brackett ve Oliphant (BO) medyumu ile direkt yıkama yöntemi, in vitro kültürleri içinse Charles Rosencrans aminoasitli (CR1aa) medyumu kullanılmıştır. Bütün süreçlerde, %5 CO2, % 95’in üzerinde bağıl nem ve 38.5oC sıcaklığa sahip inkubatör kullanılmıştır. Çalışma boyunca 122 OPU uygulaması gerçekleştirilerek birinci periyotta 565, ikinci periyotta ise 264 olmak üzere toplam 829 foliküle punksiyon yapılmış ve 228 adet oosit elde edilmiş, OPU uygulaması başına ortalama 1.90.20 adet oosit toplanmıştır. Bu oositlerin A+B+C kalite olanları in vitro embriyo elde etme sürecine alınmış ve 48. saatte ortalama 0.30.09 adet embriyo gelişimi kaydedilmiştir. İn vitro kültür süreci sonunda ise blastosist aşamasına yedi adet embriyo gelmiştir. Bireyler ve periyotlar arasında, tespit edilen ortalama folikül ve oosit sayıları bakımından önemli farklılıklar tespit edilmiştir. Sonuç olarak, ineklerde gözlenen folikül sayılarının düşük olduğu buna bağlı olarak elde edilen oosit sayısının ve elde edilen embriyo sayısının da arzu edilen düzeyde olmadığı görülmüştür. Bu veriler ışığında sığırlarda OPU tekniğinin oosit toplanması amacıyla uygulanabileceği ancak embriyo elde edilmesi için oosit vericilerinin seçimine ve bakım-besleme şartlarının optimal olmasına özen gösterilmesi gerektiği kanısına varılmıştır.
Keywords : Sığır, Oosit toplanması, Ultrason, İn vitro embriyo üretimi