Brucella melitensis dış membran protein geni Omp31’in klonlanması

Authors : Erman Oryaşin, Süheyla Türkyilmaz

Pages : 103-108

View : 21 | Download : 8

Publication Date : 2019-07-26

Article Type : Research

Abstract :Bruselloz hayvanlardan veya hayvansal ürünlerden insanlara bulaşan en önemli zoonotik hastalıklardan birisidir. Brucella melitensis, brusella cinsi içerisinde en patojen türlerden birisidir. B. melitensis 'in dış membran proteini 31 (Omp31) koruyucu bir immünojen ve önemli bir aday aşı olarak kabul edilmektedir. Bu çalışmada, B. melitensis Rev 1 suşundan Omp31’i kodlayan genin ( omp 31) klonlanması amaçlandı. Çalışmada materyal olarak B. melitensis REV-1 canlı aşı suşu kullanıldı. Suşun canlandırılmasının ardından, DNA ekstraksiyonu yapıldı. Dış membran proteini kodlayan gen bölgesi, gen bankasından bulundu. Bu bölgeyi klonlamak için gerekli primerler manuel olarak dizayn edildi. Primer dizaynından sonra polimeraz zincir reaksiyonu yoluyla çoğaltılan gen bölgesi, pET28a ekspresyon vektörüne klonlanarak Escherichia coli BL21 bakterisine transformasyonu gerçekleştirildi. E. coli BL21’den plazmid ekstraksiyonu yapıldı. Klonlama için kullanılan restriksiyon enzimi ile kesim sonucunda insert ve plazmid ayrı olarak gözlemlendi. Beklenen büyüklükte (790 bp) bulunan insert, tekrar klonlama primeri ile çoğaltılarak doğrulamak amacıyla sekans analizi yapıldı. Sekans analizi sonrasında elde edilen dizi gen bankası ile karşılaştırıldı ve insertin B. melitensis dış membran proteini olduğu doğrulandı. Bundan sonraki yapılacak çalışmalarla da klonlanan rekombinant dış membran proteini Omp31 (rOmp31)’in antijenik özelliğinin araştırılarak aşı adayı olma potansiyelinin belirlenmesi gerekmektedir.
Keywords : Brucella melitensis, klonlama