Purification of Alkaline Phosphatase from Bovine Milk and Investigation of Inhibitory Effects Of Some Veterinary Drugs on Enzyme Activity

Authors : Çiğdem Bilen, Nahit Gençer, Oktay Arslan

Pages : 195-203

View : 16 | Download : 15

Publication Date : 2015-09-01

Article Type : Other

Abstract :Bu çalışmada, fosfat metabolizmasında önemli role sahip olan Alkalen Fosfatazın ALP , sütte pastörizasyon belirteci olarak kullanılması gerekçesiyle sütte bulunan izoformu biyokimyasal yöntemlerle saflaştırılmış ve bazı veteriner ilaçların enzim aktivitesi üzerine etkileri araştırılmıştır. Enzim, çeşitli organik çözücülerle muamele edilerek, amonyum sülfat çöktürme aralıkları belirlenmiş ve elde edilen çökelek diyaliz edilerek, Sephadex G-100 jel filtrasyon kolonuna tatbik edilmiştir. Saflaştırılan enzim SDS poliakrilamid jel elektroforezine uygulanarak, elektroforezde gözlenen kazein fraksiyonları dışında, yaklaşık 85 kDa ve 185-190 kDa molekül ağırlığına sahip bandlar elde edilirken; doğal jel elektroforezinde, yaklaşık 170-190 kDa aralığında tek band gözlenmiştir. Enzim, pastörizasyon sıcaklığına gelindiğinde inaktive olacağından enzim aktivitesinin gözlenmemesi sütün pastörize olduğunu gösterir. Fakat, veteriner ilaçlar tarafından enzimin inaktivasyonu söz konusu olduğunda, pastörizasyon sıcaklığına ulaşılmadan enzim inhibe olacağından doğru bir pastörizasyon gerçekleştirilemeyecektir. Bu sebeple çalışmamızda, bazı ilaçların furosemide, atropine sulfate, toldimfos sodium and levamisol/ - - tetramisol HCI enzim aktivitesi üzerine inhibisyon etkileri incelenmiştir. Atropin sülfat enzim aktivitesini etkilemez iken, enzim aktivitesi üzerinde inhibisyon etki gösteren tetramisol, furosemid ve toldimfos sodyuma ait IC50 değerleri sırasıyla 45.48 μM, 2.19 ve 126.315 mM olarak hesaplanmıştır. ALP’nin bilinen inhibitörü olan Levamisol ile karşılaştırıldığında, enzim aktivitesini azaltan ilaçların zayıf inhibitör etki gösterdiği belirlenmiştir.
Keywords : Alkalen fosfataz, saflaştırma, inhibisyon, veteriner ilaçlar