Silica Based Specific Adsorbents for DNA Purification

Authors : Duygu Kurt, Işık Perçin, Handan Yavuz, Erhan Pişkin, Adil Denizli

Pages : 537-544

View : 26 | Download : 9

Publication Date : 2014-11-01

Article Type : Other

Abstract :B u çalışmanın amacı, plazmid DNA ve genomik DNA’nın ayrılması için silika temelli afinite sorbentlerin hazırlanmasıdır. Bu amaçla, silika partiküllerin ortalama boyut: 100-150 µm yüzeyinin modifikasyonu için 3-aminopropiltrimetoksisilan APTS seçilmiş ve yüzeyinde NH2 grubu taşıyan silika temelli afinite sorbent elde edilmiştir. APTS ile modifiye edilmiş ve edilmemiş silika partiküller elementel analiz ile karakterize edilmiştir. APTS modifiye silika partiküller üzerine genomik DNA adsorpsiyonu sürekli ve kesikli sistemde gerçekleştirilmiştir. İyonik şiddetin, pH’nın, sıcaklığın, başlangıç genomik DNA derişiminin ve akış hızının etkisi araştırılmıştır. Çalışmanın son aşamasında APTS modifiye silika partiküller kullanılarak, pEGFP-N3 plazmid DNA E.coli hücrelerinden ayrılmıştır ve sonuçlar ticari Qiagen DNA saflaştırma kiti ile karşılaştırılmıştır. Sonuçlar şöyle özetlenebilir: APTS modifiye silika partiküller üzerindeki NH2 gruplarının miktarı 38-60 mmol/g arasındadır. APTS modifiye silika partiküllerin maksimum adsorpsiyon kapasitesi 49.3 mg/g olarak bulunmuştur ve bu değer pH 7.0’de elde edilmiştir. APTS modifiye silika partiküllerin genomik DNA adsorpsiyon kapasitesi sürekli sistemde artmıştır. Adsorpsiyon kapasitesinde önemli bir düşüş olmadan APTS modifiye silika partiküllerin on adsorpsiyon-desorpsiyon döngüsünden sonra tekrar kullanılabileceği gösterilmiştir. APTS modifiye silika partiküller E.coli hücrelerinden plazmid DNA adsorpsiyonu için kullanılmış ve adsorpsiyon kapasitesi sürekli sistemde 0.21 mg/g olarak bulunmuştur
Keywords : Silika, plazmid DNA, DNA ayırma, pEGFP-N3