Trizol RNA Ekstraksiyon Metodu: İnek Plasentomu İçin Oldukça Etkili Metod Değerlendirmesi

Authors : Gözde R. Özalp, Gözde Şimşek, Sevim Akçağlar, Sima Shenavai

Pages : 1-6

View : 31 | Download : 13

Publication Date : 2010-06-01

Article Type : Other

Abstract :Trizol gibi asit guanidium fenol kimyasalları, birçok numuneden yüksek-kalite total RNA izolasyonu için olanak sağlar. İnek plasentomundan (total, maternal ve fetal) ekonomik ve tekrar edilebilir bir metotla, yüksekkalite RNA izolasyonu yapabilmek için, total RNA 1 ml guanidin tiyosiyanat içeren asit solüsyonu, sodyum asetat, fenol ve kloroform ile santrifüj edilmiştir. Total RNA isopropanol ile çöktürülmüş ve hiçbir saflaştırma kiti kullanılmamıştır. İzolasyonlar iki farklı protokole göre yapılmıştır. İsopropanol fazına kadar çalışma (a) oda ısısında (20-22°C) ve (b) buz üzerinde (0-4°C) yapılmıştır. RNA kalitesi spektrofotometrik olarak, optik dansite (OD) ölçümü ile yapılmıştır (OD260 nm/OD280 nm > 1.7). RNA bütünlüğü agaroz jel elektroforezi ile kontrol edilmiştir. Elektroforezis sonuçlarına göre (a) protokolüne göre 28s, 18s ve 5s rRNA bantlar gözlenirken, (b) protokolüne göre çoğu zaman degrade RNA bantları gözlenmiştir. Total RNA konsantrasyonu (b) protokolüne göre belirgin ölçüde yüksek bulunurken, (a) protokolüne göre saflığı ve bütünlüğü çok iyi kaliteli RNA elde edilmiştir. Elde edilen total RNA’dan cDNA dönüşümü yapılarak PCR yapılmıştır. RT-PCR ürünleri (a) protokolüne göre izole edilen RNA’dan başarıyla elde edilmiştir. (a) protokolü, inek plasentomunun total, maternal ve fetal dokularından, hiçbir saflaştırma kiti kullanmadan, yüksek-kalite RNA izolasyonu için ekonomik ve tekrar edilebilir bir metod olduğunu göstermektedir
Keywords : Plasentom, inek, Trizol, RNA