- Karaelmas Fen ve Mühendislik Dergisi
- Vol: 11 Issue: 2
- Chelon auratus (Risso, 1810)’un Karaciğerinden Glukoz-6-Fosfat Dehidrojenaz’ın Saflaştırılması ve Ki...
Chelon auratus (Risso, 1810)’un Karaciğerinden Glukoz-6-Fosfat Dehidrojenaz’ın Saflaştırılması ve Kinetik Karakterizasyonu
Authors : Salih Görgün, Emre Koç
Pages : 138-144
Doi:10.7212/karaelmasfen.858431
View : 6 | Download : 3
Publication Date : 2021-12-15
Article Type : Research
Abstract :Bu çalışmada, önemli bir kefal balığı türü olan Chelon auratus (Risso, 1810)’un karaciğerinden glukoz-6-fosfat dehidrojenaz (EC 1.1.1.49), 2′5′ ADP-Sepharose 4B afinite kromatografisi ile 252 kat saflık, 27.04 EU/mg.protein spesifik aktivite ve % 27.42 verim ile saflaştırılmıştır. Elde edilen enzim preparatı için optimum sıcaklık, pH ve iyonik güç sırasıyla 40 ºC, pH 8, ve 0.1 M olarak bulunmuştur. Enzimin kinetik davranışı gerek glukoz-6-fosfat (G6P) gerekse NADP+ için değerlendirilmiştir. Elde edilen verilere göre, Km ve Vmax değerleri NADP+ için sırasıyla 0.14 mM ve 3.40 EU/mL olarak belirlenirken, G6P için sırasıyla 0.23 mM ve 2.62 EU/mL olduğu bulunmuştur. Bu veriler, substrat olarak G6P ile karşılaştırıldığında, enzimin NADP+ için daha yüksek bir afinite sergilediğini önermektedir. Saflaştırılan enzim preparatında SDS-PAGE analizi sonucunda, molekül kütlelerinin yaklaşık olarak 108 kDa ve 60 kDa olan iki protein bandının olduğu görülmüştür. Elde edilen sonuçlar, kefal türlerinden glukoz-6-fosfat dehidrojenazın saflaştırılmasında ek kromatografik adımların gerekli olduğunu önermektedir.Keywords : Chelon auratus (Risso, 1810), glukoz-6-fosfat dehidrojenaz, saflaştırma, kinetik karakterizasyon