- İstanbul Tıp Fakültesi Dergisi
- Vol: 81 Issue: 4
- RNA ISOLATION AND DETECTION OF CELLULAR RNA QUANTITY OF SPERMATOZOA AND EMBRYOS PRIOR TO GENE EXPRES...
RNA ISOLATION AND DETECTION OF CELLULAR RNA QUANTITY OF SPERMATOZOA AND EMBRYOS PRIOR TO GENE EXPRESSION ANALYSES
Authors : Bilge Özsait Selçuk, Neslihan Çoban, Dilek Sever-kaya, Sibel Bulgurcuoğlu-kuran, Selva Türkölmez, Özlem Dural
Pages : 119-126
View : 26 | Download : 11
Publication Date : 2018-12-01
Article Type : Research
Abstract :DOI : 10.26650/IUITFD.416666 Amaç : Üreme biyolojisi araştırmalarında kullanılan örnekler genellikle, zor ulaşılabilir, nadir ve tekrarı olmayan hücre gruplarıdır. Diğer yandan, az sayıda hücre ile çalışıldığından dolayı, genetik analizlerde standart olarak kullanılan yöntemlerde modifikasyonlara ihtiyaç duyulmaktadır. Bu çalışmada amacımız, gen ekspresyonu araştırmalarında kullanılabilecek optimal düzeydeki total RNA’nın elde edilebilmesi amacı ile spermatozoa ve embriyo örneklerinden RNA izolasyon yönteminin geliştirilmesidir. Gereç ve Yöntem : Yardımla üreme tedavisi kapsamında kullanılmak amacı ile hazırlanan ve fertilizasyon işlemi gerçekleştirildikten sonra geriye kalan spermatozoa örneği diğer kontaminant hücrelerden saflaştırılarak dondurulmuştur. Diğer yandan, embriyo transferinden sonra geriye kalan preimplantasyon dönem embriyolar fosfat tamponlu tuz – polivinil alkol (PBS-PVA) karışımı içerisinde dondurularak saklanmıştır. Spermatozoa ve embriyolardan optimal düzeyde total RNA elde edilmesi amacı ile çeşitli optimizasyonlar yapılmıştır. Elde edilen total RNA’lar kaliteleri ve miktarları açısından değerlendirilmiştir. Spermatozoonda 28S ribozomal RNA (rRNA)’nın seçimli olarak degrade olmasından dolayı total RNA kalitesi, Bioanalyzer cihazı ile gerçekleştirilen analize ek olarak gerçek zamanlı kantitatif PCR ile gen amplifikasyonu yapılarak da kontrol edilmiştir. Bulgular : İzolasyonda yapılan uyarlamalardan sonra, takip eden gen ekspresyonu çalışmalarında kullanılabilecek kalitede ve miktarda total RNA elde edilmiştir. Ek olarak, örneklerden elde edilen hücresel total RNA miktarlarının önceki çalışmalar ile uyumlu olduğu belirlenmiştir. Sonuç : Daha sonra yapılması planlanan transkript profilleme araştırmaları için ön bir çalışma olarak gerçekleştirilen bu deneylerin sonucunda elde edilen bulgular, RNA izolasyon protokollerinde yapılan uyarlamaların etkin olduğunu göstermektedir.Keywords : spermatozoon, preimplantasyon dönem embriyo