- Iğdır Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Dergisi
- Vol: 8 Issue: 3
- Dereotundan (Anethum graveolens) Saflaştırılan Polifenol Oksidaz (PFO) Enziminin Bazı Killerle İmmob...
Dereotundan (Anethum graveolens) Saflaştırılan Polifenol Oksidaz (PFO) Enziminin Bazı Killerle İmmobilizasyonu
Authors : Nuran Akbulut, Halis Şakiroğlu
Pages : 191-199
Doi:10.21597/jist.418124
View : 14 | Download : 9
Publication Date : 2018-09-30
Article Type : Research
Abstract :Bu çalışmada dereotundan (Anethum graveolens) Polifenol oksidaz enzimi (PFO) kısmi saflaştırılarak bazı killere immobilize edilerek bazı özellikleri incelenmiştir. Bu amaçla önce dört farklı substrat için, optimum pH, optimum sıcaklık, optimum iyonik şiddet belirlendi. Daha sonra belirlenen optimum şartlarda bu substratlar için KM ve Vmax değerleri tespit edildi. İmmobilizasyon işlemi için farklı miktarlarda killer alınıp, 1 ml tampon çözelti içerisine 0.5 ml enzim ilave edilerek bir karışım oluşturulmuş daha sonra vortexlenerek immobilizasyon işlemi gerçekleştirilmiştir. PFO enzim aktivitesi, katekol substratı varlığında 420 nm de spektrofotometrik yöntem kullanılarak ölçülmüştür. Bu aktivitelerden yararlanarak IC50 değerleri ve Ki sabitleri hesaplanmıştır. Konsantrasyona bağlı olarak kil içindeki enzimin inhibisyon yüzdeleri hesaplanmıştır. Buna göre; 0.066 g mL-1; 0.040 g mL-1; 0.020 g mL-1; 0.0133 g mL-1; 0.0066 g mL-1 ve 0.0033 g mL-1 konsantrasyonlarında üç farklı kilden numuneler hazırlanmıştır. İmmobilize edilen enzim aktiviteleri, serbest enzim aktivitelerine göre yukarıdaki kil konsantrasyonlarında yeşil kil ile sırasıyla; %92, %86, %80, %75, %70 ve %68, sarı kil ile sırasıyla ; %80, %79, %76, %75, %70 ve %69 kırmızı kil ile sırasıyla; %84, %81, %77, %72, %66 ve %65 inhibisyona uğradıkları ve yeşil kilin dereotu PFO enzimini diğer kırmızı ve sarı killere göre daha kuvvetle immobilize olduğu bulunmuştur.Keywords : Dereotu, polifenol oksidaz, katekol, immobilizasyon, saflaştırma