- Harran Üniversitesi Tıp Fakültesi Dergisi
- Vol: 17 Issue: 1
- Tetrazolium-Based Cytotoxicity Tests May Not Always Reflect Accurate Results
Tetrazolium-Based Cytotoxicity Tests May Not Always Reflect Accurate Results
Authors : Abdullah Taşkin, Hasan Ulusal, Seyhan Taşkin, Mehmet Tarakçioğlu
Pages : 6-12
Doi:10.35440/hutfd.600652
View : 13 | Download : 2
Publication Date : 2020-04-29
Article Type : Research
Abstract :Amaç: Hücre canlılığı ve/veya sitotoksisite analizleri in vitro çalışmalarda biyolojik değerlendirme için kullanılan en önemli göstergelerdendir. Özellikle kanser araştırmalarında, in vivo ve preklinik çalışmalara kaynaklık etmesi bakımından sitotoksisite testlerinin seçimi kritik öneme sahiptir. Bu çalışmada medikal kullanımı yaygın fitokimyasal bir ürün olan bromelain ve kanser tedavisinde kullanılan antrasiklin antibiyotik bir ilaç olan idarubisin’in MTT, WST-1 ve Luminesan ATP yöntemleriyle sitotoksik etkilerinin, normal lenfosit hücre kültürü ve HL-60 promyelositik lösemi hücre hattında araştırılması ve testler arasındaki ilişkinin incelenmesi amaçlandı. Materyal ve Metod: Periferal kan lenfositleri sigara içmeyen, sağlıklı, gönüllü, genç erkek bireyden, HL-60 promyelosik lösemi hücre hattı ise ATCC firmasından sağlandı. Bromelain ve idarubisinin artan konsantrasyonları her iki hücre hattına eklendi. Hücreler, 24 saat 37 °C’de karbondioksit inkübatöründe inkübe edildi. İnkübasyon sonrası MTT, WST-1 ve ATP analizleriyle sitotoksisite düzeyleri araştırılırken, floresan boyama yöntemleriyle de morfolojik incelemeler yapıldı. Bulgular: MTT ve WST-1 analizlerinde, bromelain konsantrasyon artışına paralel olarak hücre canlılığının/formazan oluşumunun arttığı, ATP testinde ise konsantrasyon artışıyla hücre canlılığının azaldığı bulundu. Floresan boyama yöntemleri ile ATP analiz sonuçları doğrulanırken, MTT ve WST-1 negatif ilişkiliydi. İdarubisin’in sitotoksik etkisinin her iki hücre hattında 3 ölçüm yöntemi ile benzer olduğu, floresan boyama yöntemleri ile de pozitif ilişkili olduğu bulundu Sonuç: Bromelain’in lenfosit ve HL-60 hücre dizileri üzerinde MTT ve WST-1 analiz yöntemleri ile hücre canlılığı/sitotoksisite tespitinde bazı ölçüm sınırlamalarına neden olduğu bulunmuştur. Sitotoksisite çalışmalarında doğru ve güvenilir sonuçlar elde etmek için analiz edilecek fitokimyasalların interferenslere sebep olabileceği göz önüne alınarak yöntem seçimi dikkatlice yapılmalı ve başka metodlarla sonuçlar doğrulanmalıdır.Keywords : Bromelain, idarubisin, sitotoksisite testleri, interferans, tetrazolyum