- Harran Üniversitesi Tıp Fakültesi Dergisi
- Issue: 3 - IONCC 2017 Special Issue
- Hyperthermia and Plasma Membrane Ca ATPase: Is There Any Effect of HT on PMCA?
Hyperthermia and Plasma Membrane Ca ATPase: Is There Any Effect of HT on PMCA?
Authors : Armağan Caner, Müge Gülcihan Önal
Pages : 46-59
View : 4 | Download : 2
Publication Date : 2017-12-30
Article Type : Research
Abstract :Giriş ve Amaç:Hipertermi (HT) ile kanser hücrelerini tedavi etme fikri en az 5000 yıl öncesine dayanır. Kanser araştırmalarındaki geçmiş teknolojiler, özellikle derin çekirdekli tümörlerde, tam olarak etkili ve homojen bir ısıtma sağlayamadığından dolayı modern kanser araştırmalarında HT’ye ilgi eksikliğine sebep oldu. Ayrıca, HT'nin kanser hücrelerinde apoptozu indüklediği bilinmektedir. Öte yandan, plazma membranı Ca ATPaz (PMCA), apoptoz yolaklarında önemli bir pompadır. PMCA, hücredeki Ca iyonlarını hücrenin dışına pompalar. Bu çalışmanın amacı HT'nin PMCA kinetik parametrelerine etkisini değerlendirmektir. Yöntem:PMCA üzerinde HT'nin etkisini değerlendirmek için, kırmızı kan hücrelerinin plazma membranı kullandık. Sağlıklı donörden izole edilen insan kırmızı kan hücreleri, termomikser kullanılarak 30 dakika, 60 dakika, 90 dakika, 120 dakika boyunca 37oC, 44oC, 50oC'de ısıtıldı. Eritrositler (39ul) lizis çözeltisi 1,7ml eklendi ve 15 dakika inkübe edildi. İnkübasyon sırasında karışım hafifçe karıştırıldı. Karışım 0°C'de 20 dakika için 17000 xg'de santrifüje tabi tutuldu. Bunlar, 1,7 ml KCl tampon içinde yeniden süspansiyona alınmış ve tekrar santrifüje tabi tutulmuştur. Daha sonra, eritrositlerden hemoglobin çıkarılır. Bundan sonra, 0.4 ml'lik bu boş eritrosit süspansiyonu, Indo 1FF-AM ile 0.1 ml tampon ile karıştırıldı. Bu süspansiyon, buz üzerinde 15 dakika inkübe edildi. Bu boş eritrositler 37°C'de 45 dakika inkübe edilerek tekrar kapatılmış ve kullanıma kadar buz üzerinde depolanmıştır. Sonuçlar:Kalsiyum konsantrasyon seviyelerine göre kontrol ile diğer sıcaklık arasında belirgin farklar vardır. Ayrıca, 37oC ile diğer sıcaklık arasında belirgin bir fark vardır. PMCA 37oC üzerindeki sıcaklıklarda çok iyi çalışmadı. Bu nedenle, yüksek kalsiyum konsantrasyonu ölçüldü. Pompa düzgün bir şekilde çalışıyorsa, kalsiyum konsantrasyon seviyesi zamanla azalacaktır. Aksine, eritrosit keseciklerinde artan kalsiyum konsantrasyon seviyeleri ölçtük. HT’ye maruz kalan PMCA, yüksek sıcaklıktan etkilenir ve PMCA çalışmaz, böylece Ca iyonları hücrelerden dışarı çıkamaz. Hücre ölümü ısının etkisi ile bozulan PMCA kinetiğinden dolayı tetiklenmektedir.Keywords : PMCA, Ca görüntüleme, Hipertermi