- Etlik Veteriner Mikrobiyoloji Dergisi
- Vol: 3 Issue: 7-8
- Büyük Mikyasta Şap Virusu İstihsalinde BHK-21 (Yavru Hamster Böbreği) Hücre Kültürünün Kullanılması ...
Büyük Mikyasta Şap Virusu İstihsalinde BHK-21 (Yavru Hamster Böbreği) Hücre Kültürünün Kullanılması Üzerinde Çalışmalar
Authors : Güngör Okay, H. C. Girard, M. Sütçü, M. Şentürk, Macit Oral, Cemil Boz, Orhan Bayramoğlu, Nejdet Yalim, Necati Ünlüleblebici, Ilhan Süer, Cumhuriye Anter
Pages : 55-68
View : 10 | Download : 1
Publication Date : 1969-12-01
Article Type : Research
Abstract :BHK- 21 Hücre Dizisi % O.S Lactalbumin hydrolysate, % 0.01 Yeast extr-act ve % 10 Sığır serumu .ihtiva eden Hanks' Dengeli Tuz Soh.ısyonu (HYL) içinde önce manolayer sabit hücre kültürlerinde tiretilmiştir. Vasattan Yeast extract ' çıkarıldığında BHK- 21 · hücresini üretmek mümkün olamamış ve BHK hücresinin HYL ı vasatında üretilmesinde Yeast extract ilavesinin şart olduğu anlaşılmıştır. Manolayer üremeye adapte olmuş hücre Bellco cihazı ve New Brunswick fermentörleri~1de seri pasajlar yapı~arak . suspansiyon kültürüne adapte edilmiştir. Susparisiyon hücre kültürü çalışmalaı ·ında, üremenin 24. cü saatinde vasat % 1 Tryptose Phosphate Broth ile takviye edilmiştir. New Brunswick fermentörlernide pH . ayarlaması 24. cü saatten itilxiren 300 cc/ dakika superfisiyal steril· hava verilerek yapılmıştır. Suspansiyon ~ültürü çalışmalarında başlangıç hücre sayısı 1.0- 1.2 X lOS /ml olduğu haller de, 48 saate, 2- 3 misli çoğalma elde eelilmesine rağmen, 5.0 X 104 hücre/ml ile başlandığında ortalama 5 misli üreme elde edilmiştir. Başlangıç hücre· sayısının fazla olduğu birinci durumda 24. cü saatten itibaren pH kontrolü ele güçleşmiştir. Halbuki, 5.0 x 104 hücre/ml ile başlandığında superfisiyal hava vermekle pH .7.2 -7.4 arasında tutulabill!lektedir. Rolling sistemde kültür hazırla,nabilmesi için enkubasyonun 48. ci saatinde toplanan hÜcre suspansiyonu bir gece + 4 oc de bekletilerek hücreler dibe çöktürülmüş, ertesi günü, üstteki mayi aıılarak, dibe çöken hücreler % 10 sığır -serumlu HYL vasatında W.OOO hücre/ ml olacak şekilde sulandırılmış, 1 litre kapasiteli yuvarlak şişelere 150 ml tevzi edilerek rolling sistem etüvüne koyulmuştur. Hücrenin üreyip şişe sathını tamamen kaplaması 3 gün içinde olmaktadır. Bunu takiben şişelerdeki vasat boşaltılmış ve 0.1 TCDso virus/hücre olacak şekilde (Dana böbreğii1e veya BHK hücresine 5-6 pasajcia adapte olmuş virus) virus ilave edilen HYL vasatından herbir şişeye 100 ml konularak enfeksiyonun 30. cu saatinde toplanmıştır. Bu anda hücreler şişe satlımdan tamamen kalkmış bulunmaktadır. Aşı istihsalinde kullanılacak bu virus önce % ı nisbetinde chloroform'la karıştınlıp bir gece + 4 oc de bekletilerek, ertesi gün, 10.000 rpm de santrifüj edilmiş; aynı işlem ikinci defa % 0.6 nisbetinde chloroform'la tekrarlanmıştır. Aşı hazırlanmadan evvel ayrıca , Seitz K- S klarifiye filtre kağıdından süzülmüştür. Virusun BHK hücresinde enfektivite titresi CPE test'i ile, areton ı B le muamele4en önce, (AT) ve sonra (ATAT) antij~nik titreleri de semi- kantitatif complement- fixation test' i ' ile ' yapılmıştır. 5 ml lik sığır aşı dozuna 2 ml virus ilave edilmiştir. Aşılar formulle inaktive olup, adjuvant olarak sapanin kullanılmıştır. Virusun enfektivite ve antijenik titreleri ile eprüvasyon sonuçları çok tatminkar olup, (Tablo : ı) de gösterilmiştirKeywords : Şap Virus, Şap, Virus, Hücre Kültürü, Hamster Böbreği