- Afyon Kocatepe Üniversitesi Fen Ve Mühendislik Bilimleri Dergisi
- Vol: 19 Issue: 1
- Bacillus pumilus Y7 Katalaz (katX2) Geninin Klonlanması ve Açıklatılması
Bacillus pumilus Y7 Katalaz (katX2) Geninin Klonlanması ve Açıklatılması
Authors : Yonca YÜZÜGÜLLÜ KARAKUŞ, Günce GÖÇ
Pages : 15-21
Doi:10.35414/akufemubid.463776
View : 10 | Download : 2
Publication Date : 2019-05-28
Article Type : Research
Abstract :Katalazlar antioksidan metalloenzimler sınıfına dahil olup başlıca işlevleri hidrojen peroksidin (H 2 O 2 ) su ve moleküler oksijene parçalanmasıdır. Temel fonksiyonlarının yanında düşük seviyede peroksidaz ve(ya) oksidaz aktivitesi göstererek izoniazid (antitüberküloz ilacı) sentezi gibi tıbbi öneme sahip bazı bileşiklerin sentezini destekledikleri bilinmektedir. Yakın bir geçmişte Bacillus pumilus tarafından üretilen 'Fe/hem' grubu içeren bir enzimin katalaz, peroksidaz ve penisilin oksidaz aktiviteleri gösterdiği yayınlanmıştır. Bunun üzerine bu enzimin hem diğer katalaz, peroksidaz ve katalaz-peroksidazlar ile karşılaştırılması hem de ikincil peroksidaz/oksidaz özelliğinin ayrıntılı olarak irdelenebilmesi için enzimi kodlayan katX2 geninin klonlanması ve Escherichia coli ’de üretimi gerçekleştirilmiştir. Restriksiyon enzimlerinden bağımsız gerçekleştirilen klonlama tekniğinde ilk olarak B. pumilus Y7’den elde edilen katX2 geni kimerik primerler (5'katX2; 3'katX2) ile bir araya getirilerek megaprimer oluşturulmuş ve sonrasında bu megaprimer ekspresyon vektörüne başarılı bir şekilde aktarılmıştır. 510 amino asitten oluşan olgun proteini kodlayan katX2 genini taşıyan pET28aTEV vektörü E. coli BL21 (DE3 star) hücrelerine transforme edilmiştir. Transformantlarda katalaz aktivitesi için en yüksek değer (800 µmol ml -1 dak -1 ) 30ºC’de, IPTG (0,1 mM) varlığında, 120 rpm çalkalama hızında 24 saat büyütüldüğü ekspresyon koşullarında ulaşılmıştır.Keywords : Katalaz, Peroksidaz, Oksidaz, Bacillus pumilus