- Mediterranean Agricultural Sciences
- Vol: 32 Issue: 1
- One step modification of Chlamydomonas reinhardtii BACs using the RED/ET system
One step modification of Chlamydomonas reinhardtii BACs using the RED/ET system
Authors : Münevver Aksoy, Charlene Forest
Pages : 49-55
Doi:10.29136/mediterranean.508032
View : 9 | Download : 5
Publication Date : 2019-04-01
Article Type : Research
Abstract :Tüm genom sekansının tamamlanması üzerine, Chlamydomonas BAC’ları fonksiyonel genomik analizlerinde yaygın bir şekilde kullanılmaktadır. Fakat bu vektörlerin hazırlanmalarında kullanılan aşağıdaki sebeplerden dolayı bu tip analizlerde kullanımları optimalden daha düşük olmaktadır: (1) Bu BAC’larda komplementasyon analizlerinde elde edilen transformantların direk seçimini sağlayan bir gen yoktur. (2) BAC ve bağımsız bir vektörün ko-transformasyon (birlikte transformasyon) olarak kullanımında birlikte transformasyon oranı düşüktür. (3) BAC’ların çoğu birden fazla gen içermektedir, bu da her genin farklı bir vektöre sub-klon (alt klonlama) yapılmasını gerektirmektedir (bu da restriksiyon enzimlerine bağımlılık demektir). Bu çalışmada, BAC transformasyonu işlemini kolaylaştırmak için, RED/ET tekniğini kullanarak Chlamydomonas BAC’larına 2 selectable marker cassette (seçilebilir ekspresyon kaseti) eklenmiştir. Bir ökaryotik ve bir prokaryotic ekpresyon kaseti ligasyon edilmiş ve BAC’ların iki basamak modifikasyonu yerine, tek basamakta modifiye edilmesi sağlanmıştır ve bu kasetlerin ekspresyonu kanıtlanmıştır. Böylelikle BAC’ların Chlamydomonas ’da fonksiyonel genomik analizlerinde kullanımları için harcanacak zaman süresi azalacaktır.Keywords : Chlamydomonas reinhardtii, BAC rekombinasyonu, Fonksiyonel genomik, Komplementasyon