Adacık Benzeri Hücre Kümeleşmesinde Gen Anlatım Değişimleri
Authors : Mehveş Poda, Buşra Gizem Hasanoğulları, Fatma Yeliz Ekici, Feyza Nur Tuncer
Pages : 87-92
View : 13 | Download : 3
Publication Date : 2017-06-01
Article Type : Research
Abstract :Amaç: PANC-1 hücre hattı ekzokrin pankreastan kaynaklı, insüline proliferatif tepki veren bir kanser hücre hattıdır ve bu hücrelerde PDX1, KLF4 ve OCT4 transkripsiyon faktörlerinin endojen olarak gen anlatımının varlığı daha önce de bildirilmiştir. Bu hücreler özel kültür şartları altında indüklendiklerinde, pankreatik hormon üreten adacık-benzeri hücre kümeleşmeleri (AHK) oluşturabilirler. Üç boyutlu yapılar olan AHK oluşumlarının, metabolik yolakların da incelenebileceği bir hücresel model olabileceği öngörüsüyle, SST, GCG, PDX1, KLF4 ve OCT4 gen anlatım düzeylerindeki değişimlerini karakterize etmeyi amaçladık. Yöntem: Bazal kültür şartları ile AHK protokolü uygulanmış hücrelerdeki gen anlatım düzeylerinin karşılaştırılabilmesi amacıyla, hücre lizatlarından total RNA eldesi yapıldı. Daha sonra cDNA elde edilerek SYBR-Green kullanımıyla SST, GCG, PDX1, KLF4 ve OCT4 gen anlatım düzeyleri gerçek zamanlı PCR metoduyla belirlendi. Gen anlatım farkı, PPIA geni normalizasyon referansı alınarak DDCt metodu kullanıldı ve istatistik anlamlılıklar düzeyleri two paired ANOVA metodu ile hesaplandı. Bulgular: Bazal şartlara göre karşılaştırma yapıldığında, indüklenmiş AHK oluşumlarının 24 ve 336’ıncı saatlerinde, Glukagon (GCG) (p=0.2) ekspresyonunun hafifçe azalarak sabit kaldığı, ancak bu değişimin anlamlı olmadığı saptandı. Buna karşılık, Somatostatin (SST) (p=0.0014) gen anlatımında bazale göre, 24’üncü saatte 2.3 kat, 336’ıncı saatte 10.82 kat artış saptandı. PDX1 (P=0.02) ve KLF4 (P=0.15) gen anlatımları bazala göre düşmekte ve sabit kalmaktaydı. OCT4 (P=0.03) gen anlatımı ise önce düşmesine rağmen daha sonra 2.8 kat yükselmekteydi. Sonuçlar: AHK oluşumu sonucunda özellikle SST gen anlatımının yükseldiği saptanmış olması oluşan hücre kümeleşmelerinin ağırlıkla Langerhans delta hücresi benzeri karakterlere sahip olabileceğine işaret etmektedir. Bu ön bulgular oluşan deneysel modelin faydalı bir model olarak kullanılacağına işaret etmektedir.Keywords : PANC-1, Adacık Benzeri Kümeleşme (AHK), SST, GCG, PDX1, KLF4, OCT4