- Journal of Anatolian Environmental and Animal Sciences
- Vol: 4 Issue: 3
- Farklı Metotlar Kullanılarak Elde Edilen Aynı Miktar Bakteriyel DNA’lar Arasındaki Konsantrasyon Far...
Farklı Metotlar Kullanılarak Elde Edilen Aynı Miktar Bakteriyel DNA’lar Arasındaki Konsantrasyon Farklılıklarının Belirlenmesi
Authors : Şükrü Önalan, Sümeyye Adali, Abuzer Taş
Pages : 322-327
Doi:10.35229/jaes.626493
View : 22 | Download : 4
Publication Date : 2019-12-30
Article Type : Research
Abstract :Bu çalışmada kültüre alınmış olan L. garvieae izolatları aynı besiyeri (TSA) ve miktarı (20ml) ile aynı çevresel şartlarda (7,4 pH, 21 o C, 24 saat) inkübe edilmiştir. İzolatların identifikasyonları Real-Time PCR ile 16S rRNA gen bölgesine spesifik primer assay ile teyit edilmiştir. 24 saatlik inkübasyon periyodunun ardından 10ml’lik TSB besiyerinde gelişen izolatlar 600 nm dalga boyunda 1.0 OD’ye eşitlenmiştir. Farklı gruplardan DNA izolasyonları; sıvı besiyerinde kaynatma, katı besiyerinde (Eşit OD) kaynatma, 2 farklı ticari kit kullanılarak manuel izolasyon ve otomatik izolasyon robotu olmak üzere toplam 5 farklı metotla gerçekleştirilmiştir. İzole edilen DNA’ların ve gerçekleştirilen Real-Time PCR işleminin ardından izolasyon robotu ile elde edilen sonuçlarda DNA kalitesinin en iyi olduğu, bunu takiben ticari kitler, sıvı besiyeri izolasyonu ve katı besiyeri izolasyonları olduğu görülmüştür. Real-Time PCR grafiğinde, çalışma grupları arasındaki tekerrürler içerisinde en büyük sapma sıvı besiyeri izolasyonu ve ticari kit izolasyonunda gözlenmiştir.Keywords : DNA izolasyonu, spektrofotometrik ölçüm, Real-Time PCR, balık hastalıkları, L. garvieae