- Türk Tarım ve Doğa Bilimleri Dergisi
- Vol: 10 Issue: 1
- The Basic Experimental Setup for the Vacuum-assisted, Agrobacterium-mediated Transient Expression in...
The Basic Experimental Setup for the Vacuum-assisted, Agrobacterium-mediated Transient Expression in Tomato
Authors : Cansu Bülbül, Inanç Soylu, Selcen Doğan, Sevilay Münire Girgin, Nedim Mutlu
Pages : 97-106
Doi:10.30910/turkjans.1112981
View : 9 | Download : 3
Publication Date : 2023-01-28
Article Type : Research
Abstract :Hedef genleri bitkilere aktarmak için çeşitli yöntemler kullanılmaktadır. Bunlardan, Agrobacterium aracılı transformasyonda, bitkiye genler kalıcı olarak ikili vektör sistemi ile aktarılabilmektedir. Ancak bu yöntem ile transgenik bir bitki elde etmek için birkaç aylık bir zamana ihtiyaç duyulduğu düşünüldüğünde, süreç oldukça yoğun iş gücü, emek ve zaman gerektirmektedir. Geçici gen ekspresyonu (örn., vakum-infiltrasyon) sistemleri, özellikle zamanla ilgili dezavantajların üstesinden gelmek için, kalıcı transformasyona alternatif olarak kullanılabilmektedir. Ancak bu yöntemde, vakum odaları gibi pahalı ekipmanlara ihtiyaç duyulmaktadır. Bu çalışmada, domates fidelerinde bir raportör gen olan modifiye yeşil floresan proteinin (mGFP) geçici ifadesini gösteren bir vakum-infiltrasyon protokolü rapor edilmektedir. Çalışma sonucunda, uygun fiyatlı ekipmana sahip temel bir deney düzeneği (özel yapım bir büyüme odası dahil) ile 6 dakika boyunca ve sadece 200 milibarlık bir vakum uygulanarak tüm yaprağa ilgili geni taşıyan Agrobacterium solüsyonunun infiltre edilebileceği, böylece domateste geçici gen ifadesinin sağlanabileceği gösterilmiştir. Sonuç olarak, T-DNA, PCR ile tespit edilmiş, mGFP\'nin varlığı hem SDS-page analizi ile analitik olarak hem de floresan mikroskobu ile görsel olarak belirlenmiştir.Keywords : Bitkide geçici gen ifadesi, vakum infiltrasyonu, Agrobacterium aracılığıyla gen aktarımı, Solanum lycopersicum