- Türk Doğa ve Fen Dergisi
- Vol: 10 Issue: 1
- Characterization of a Thermally Stable β-galactosidase Produced by Thermophilic Anoxybacillus sp. AH...
Characterization of a Thermally Stable β-galactosidase Produced by Thermophilic Anoxybacillus sp. AH1
Authors : Ömer Acer, Fatma Matpan Bekler
Pages : 130-136
Doi:10.46810/tdfd.835632
View : 8 | Download : 2
Publication Date : 2021-06-25
Article Type : Research
Abstract :Termofilik bakterilerden elde edilen termostabil β-galaktosidazlar, endüstriyel ve biyoteknolojik uygulamalarda çeşitli avantajlara sahip oldukları için ilgi çekmektedir. Bu çalışmada, Anoxybacillus sp. AH1'den üretilen, oldukça termostabil olan β-galaktosidaz, saflaştırıldı ve karakterize edildi. En yüksek enzim üretimi, bakterinin 24 saat inkübe edilmesinden sonra elde edildi. Enzim, amonyum sülfat çöktürmesi, diyaliz ve jel filtrasyon kromatografisi (Sephadex G-75) kullanılırak saflaştırıldı. Saflaştırma aşamalarından sonra, β-galaktosidazın % 13,9 verimle 10,2 kata kadar saflaştırıldığı tespit edildi. β-galaktosidazın moleküler kütlesi, SDS-PAGE ile 75 kDa olarak tahmin edildi. Saflaştırılmış enzimin oldukça stabil olduğu ve 120 dakika sonunda 60 ° C'de orijinal aktivitenin% 71'ini, 70 ° C'de ise % 53'ünü koruduğu tespit edildi. Saflaştırılmış β-galaktosidazın Km ve Vmax değerleri sırasıyla 1,249 mM ve 0,5 μmol dakika-1 olarak hesaplandı. Ca2+, Zn2+ ve Mg2+ β-galaktosidaz aktivitesini önemli ölçüde aktive ederken, Cu2+ ve metal iyon şelatörleri, 1,10-phenanthroline (phen) ve ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) enzim aktivitesini önemli ölçüde inhibe etmiştir. Saflaştırılmış β-galaktosidaz aktivitesi 2 mM PMSF (phenylmethylsulfonyl fluoride), PCMB (p-chloromercuribenzoic acid), DTT (dithiothreitol), ve β-ME (β-mercaptoethanol) ile artar iken, 1 mM NEM (N-ethylmaleimide) ile tamamen inhibe edildiği belirlendi.Keywords : enzim aktivitesi inhibisyonu, termostabil b-galaltosidaz, enzim saflaştırma, Anoxybacillus sp. AH1.