- Süleyman Demirel Üniversitesi Sağlık Bilimleri Dergisi
- Vol: 11 Issue: 2
- Geri Yansıma Spektroskopisi ile Hücre Kültürü Çalışmalarında Hücre Sayısının Belirlenmesi İçin Yeni ...
Geri Yansıma Spektroskopisi ile Hücre Kültürü Çalışmalarında Hücre Sayısının Belirlenmesi İçin Yeni Bir Metot
Authors : Aslınur Sircan Küçüksayan, Ertan Küçüksayan
Pages : 231-235
Doi:10.22312/sdusbed.714680
View : 7 | Download : 3
Publication Date : 2020-06-15
Article Type : Research
Abstract :Giriş: Hücre kültürü çalışmaları hastalıkların teşhis ve tedavisine yönelik çalışmalar ve ilaç araştırmaları gibi pek çok alanda kullanılan önemli bir in vitro deney modelidir. Hücre kültüründe yapılan çalışmalarda; hücre sayımı sıklıkla tekrarlanan ve deneylerin standardizasyonu ve/veya optimizasyonu için önemli bir süreç olarak kabul edilmektedir. Hücre sayımı otomatik hücre sayım cihazları ile yapılabilmektedir ancak bu tür cihazlar yüksek maliyet ve hücre kayıpları gibi dezavantajlara sahiptir. Hücre sayımı için yaygın olarak kullanılan bir diğer yöntem ise hemositometredir. Bu yöntemde hücre sayım işlemi manuel olarak yapıldığından uzun süreli çalışmalarda, sayımın doğruluğu araştırmacının dikkatine bağlı olması dolayısıyla, hata oranı artabilmektedir. Hücre sayısını belirlemenin en ideal yolu hücrelerin ortamlarını değiştirmeden, önemli ölçüde pH veya sıcaklık değişimi yaratmadan hızlı ve doğru ölçüm yapabilmektir. Bu çalışmanın amacı hücre kültürü deneylerinde hücre sayısını belirlemek için geri yansıma spektroskopisi kullanarak ile yeni bir yöntem geliştirmek. Materyal-Metot: Bu çalışmada, spektrometre, tungsten-halojen ışık kaynağı ve fiber optik probtan oluşan bir deney düzeneği kullanıldı. Işık fiber optik probun kaynak fiberleri ile numuneye gönderilir, numuneyle etkileştikten sonra geri yansıyan ışık fiber optik probun dedektör fiberleri ile toplanır ve spektrometreye gönderilerek Dalga boyuna bağlı ışık şiddeti spektrumu elde edilir. Bu spektrumun analizi ile numunelerdeki hücre sayısı belirlenebilir. Bunun için A375 malin melanoma hücreleri standart hücre kültürü tekniği ile çoğaltıldı. Hücreler tripsin ile flasktan kaldırılıp hücre sayım cihazı ile sayıldı. Son hacim 1 ml olacak şekilde farklı hücre sayısı (0-32.5x105) aralığında toplam 10 numuneden ışık şiddeti ile hücre sayısı arasındaki ilişkiyi belirlemek için ölçümler yapıldı. Aynı yöntemle son hacim 1 ml olacak şekilde (5-30x105) hücre sayısı aralığında toplam altı numuneden daha ışık şiddeti ile hücre sayısı arasında belirlenen ilişkiyi test etmek için ölçümler yapıldı. Bulgular: Farklı hücre sayılarındaki numuneler için dalga boyuna karşı ışık şiddeti spektrumları elde edildi ve spektrumların hücre sayısına bağlı olarak değiştiği belirlendi. Bu spektrumlardan elde edilen K (450-700 nm) parametresine karşı hücre sayısını veren bir kalibrasyon grafiği bulundu. Bu yöntem ile numunelerin hücre sayılarının %1.9-6.5 arasındaki hata oranları ile belirlendi. Sonuç: Bu çalışmada fiber optik prob ile dalga boyuna bağlı geri yansıma ölçümleri yapılarak hücre kültürü koşullarına minimum müdahale ederek hücre sayısını gerçek zamanlı belirleyebilen yeni bir yöntem geliştirildi. Bu yöntem hücre sayısının zamana bağlı izlenmesine olanak veren invazif olmayan, objektif, tekrarlanabilir ve tecrübe gerektirmeyen bir teknik olarak geliştirilme potansiyeli vardır.Keywords : Hücre kültürü, Hücre sayımı, Fiber Optik Prob, Geri Yansıma Spektroskopisi