- Sakarya Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Dergisi
- Vol: 22 Issue: 6
- Cloning, Expression and Characterization of Xylanase (xyn-akky1) from Bacillus subtilis in Escherich...
Cloning, Expression and Characterization of Xylanase (xyn-akky1) from Bacillus subtilis in Escherichia coli
Authors : Sema Bilgin, Yakup Ulusu, Hülya Kuduğ, Isa Gökçe
Pages : 1508-1517
Doi:10.16984/saufenbilder.327153
View : 24 | Download : 9
Publication Date : 2018-12-01
Article Type : Other
Abstract : Bu çalışmada, Bacillus subtilis akky1 straini Türkiye’nin Ordu İli’nin Akkuş ilçesindeki kayın ormanından alınan topraktan izole edilmiştir. akky1 straini 16S rRNA analizi ile tanımlanmıştır. 16S rRNA dizisi Bacillus subtilis strain B7 (KC310823.1) ile %100’lük bir benzerlik göstermiştir. GenBank’da verilen Bacillus subtilis ksilanazına ait gen dizisi esas alınarak tasarlanan primerler kullanılarak genomic DNA’dan 642 bp’lik bir DNA fragmenti elde edilmiştir. Ksilanazı kodlayan gen, pET28b (+) ekspresyon vektörüne klonlanmış ve Escherichia coli BL21 (DE3)’de ekpresse edilmiştir. Rekombinant olarak üretilen protein nikel afinite kromatografisi ile saflaştırılmış ve ksilanaz aktivitesi belirlenmiştir. Saflaştırılan ksilanazın moleküler ağırlığı SDS-PAGE ile 26.0 kDa olarak belirlenmiştir. Rekombinant enzimin optimum pH’sı 6.0 ve sıcaklığı 60°C, Km değeri ise 3.33 mg/ml olarak tespit edilmiştir.Keywords : Bacillus subtilis, Ksilanaz, Rekombinant Protein, Endüstriyel Enzimler, Escherichia coli